https://doi.org/10.1093/ajcn/nqac286

背景：腸道微生物組成與心血管疾病密切相關(guān)鳖直，其機制包括已報道的代謝產(chǎn)物（如氧化三甲胺(TMAO)）的有害影響悯女，已被作為研究的診斷和治療靶點。據(jù)有關(guān)報道姥咖，適量飲用紅酒（RW）可以保護心臟犀震，可能是通過影響腸道微生物組成發(fā)揮作用。

目的：采用交叉試驗的多組學評價方法碟灾，研究飲用紅酒（RW）對冠狀動脈粥樣硬化性心臟操靼印（CAD）患者腸道微生物組成动娄、血漿TMAO和血漿代謝組的影響。

方法：我們進行了一項隨機伟秩、交叉篓疚、對照試驗，研究對象為42名患有CAD的男性(平均年齡60歲)蚓夺，比較服用3wk的RW(250mL/d熊朵，5d/wk)和同樣時間戒酒的情況兢涡，兩組先前都有2wk的洗脫期赛喊。通過16S rRNA高通量測序分析腸道微生物組成。

采用LC-MS/MS法測定血漿TMAO局待，采用超高效LC-MS/MS法測定隨機抽取的20名受試者的血漿代謝組進行分析斑响，采用配對檢驗方法進行個體比較從而評價RW攝入的影響。

結(jié)果：在RW干預和戒酒之間钳榨，血漿TMAO沒有顯著差異舰罚，且TMAO濃度隨時間顯示出較低的個體內(nèi)部一致性，在控制期內(nèi)組內(nèi)相關(guān)系數(shù)為0.049薛耻。RW攝入后营罢，腸道微生物組成發(fā)生了明顯的重塑，β多樣性和優(yōu)勢度發(fā)生了變化饼齿，出現(xiàn)了副桿菌饲漾、反芻球菌科、幾種擬桿菌和普氏桿菌的差異缕溉。血漿代謝組學分析顯示考传，服用RW后代謝物發(fā)生了顯著變化，與改善的氧化還原動態(tài)平衡一致证鸥。

結(jié)論：腸道微生物群的調(diào)節(jié)可能有助于解釋適度飲用紅酒對心血管的好處僚楞。TMAO的個體內(nèi)部一致性較低，對其作為個人層面的心血管風險生物標志物的作用提出了挑戰(zhàn)四酱。該研究在clinical trials.gov注冊為NCT03232099闽芳。

關(guān)鍵詞：腸道微生物組成、代謝組學扑详、氧化三甲胺(TMAO)媚尊、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、葡萄酒研镀、氧化還原

腸道微生物組成在心血管疾病(CVD)病理生理學的研究中剃坦，關(guān)于飲食對腸道微生物的組成、功能以及與宿主相互作用的影響的認識日益增加焙檀。

氧化三甲胺(TMAO)是一種腸道微生物依賴的代謝產(chǎn)物绝电，主要是膽堿和肉毒堿忿奈，已被廣泛報道與心血管疾病和主要不良心血管事件(MACEs)有關(guān)。腸道微生物組成中的不同分類群將這些膳食前體代謝成三甲胺(TMA)默在，三甲胺通過肝臟中的黃素單加氧酶轉(zhuǎn)化為TMAO饰址。血漿TMAO與動脈粥樣硬化的負荷相關(guān)，并可獨立預測心肌梗死跺诈、卒中和心血管死亡产舞。

目前，改變血漿TMAO濃度不同的干預措施已被提出菠剩，例如與膽堿含量有關(guān)的飲食調(diào)整易猫，通過服用益生素膳食補充劑調(diào)節(jié)以及臨床干預腸道微生物組成。例如具壮，關(guān)于使用膽堿的結(jié)構(gòu)類似物3准颓，3-二甲基-1-丁醇(DMB)和腸道微生物組成靶向抑制劑碘甲基膽堿的實驗研究已被證明可非完全性地抑制TMA和TMAO的形成且降低TMAO濃度。

紅酒(RW)是腸道微生物組成和血漿TMAO的一個潛在影響因素棺妓。RW被認為具有促進健康的作用攘已，適量的RW攝入與心血管事件、癌癥和總死亡率的較低發(fā)生率相關(guān)怜跑，這主要歸因于其多酚成分样勃。

葡萄酒中的主要酚類化合物是黃酮類化合物，特別是黃烷醇性芬、黃酮醇和花青素峡眶。其他非黃酮類化合物，如羥基苯甲酸和羥基肉桂酸批旺、酚醇和二苯乙烯鹿连，也是葡萄酒中的關(guān)鍵成分。多酚的化學結(jié)構(gòu)猪玛、食物基質(zhì)和腸-肝循環(huán)會影響多酚的生物利用度和吸收磷拧，而且很大比例的多酚不被小腸吸收。因此衩斋，～90%的多酚原型到達結(jié)腸者赴，進而發(fā)揮調(diào)節(jié)功能，并可能扮演類似益生菌的角色瞎介；在那里碗厕，它們作為細菌發(fā)酵的燃料，并可被大部分腸道細菌獲得融辈。

因此誓华，RW的一些有益作用可能通過改變腸道微生物組成、糞便代謝組和血漿代謝組而發(fā)生胧蹲。例如菇唇，葡萄多酚原花青素能誘導粘液阿克曼氏菌在腸道富集囊祝，該菌屬與改善新陳代謝健康有關(guān)。

此外匪补，Le Roy等在3個獨立的人類隊列中伞辛，報道了與RW服用相關(guān)的腸道微生物組成的α多樣性增加。此外夯缺，根據(jù)一項嚙齒類動物研究蚤氏，RW含有DMB，一種膽堿的結(jié)構(gòu)類似物踊兜，可能會抑制腸道中TMA的形成竿滨，并降低血漿TMAO濃度。在這種情況下润文，多酚在循環(huán)系統(tǒng)中的生物活性也可能取決于腸道微生物組成將其轉(zhuǎn)化為生物可利用代謝物的能力姐呐，這突顯了在測試給定干預措施時評估微生物組成和血漿代謝組的重要性殿怜。

然而典蝌，患有冠狀動脈疾病(CAD)患者腸道微生物組成、TMAO和血漿代謝組學之間的關(guān)系仍未得到充分研究头谜。本研究旨在評估42例男性冠心病患者短期適量飲酒對腸道微生物組成和血漿TMAO的影響骏掀，并與戒酒的男性患者進行比較。此外柱告，還試圖闡明RW對20名患者的血漿代謝組的影響退博。

這是一個隨機、對照（1:1）的交叉試驗旋囤，由兩個為期3周的干預措施組成：一個涉及飲用RW别印，每天250mL，每周5天凯怕；另一個涉及戒酒嫁昌。

每項干預之前都有2周的洗脫期，不食用任何酒精飲料甩楷、發(fā)酵食品锁荚、益生菌或益生元。該試驗在www.clinicaltrials.gov 注冊號NCT03232099催锯，從2016年8月至2018年5月進行滴练。

患者來自巴西圣保羅圣保羅大學心臟研究所（Heart Institute, University?of S?o Paulo, S?o Paulo, Brazil），并從當?shù)貓蠹埡彤數(shù)貜V播電臺的廣告中進行招募孵熏。

符合入選條件的冠心病患者年齡在46歲至69歲之間摊桅，體重指數(shù)(kg/㎡)<30，病情穩(wěn)定且無癥狀捺氢。由于酒精代謝和TMAO代謝可能因性別不同而有所差異藻丢，所以本研究只選擇男性以使樣本均質(zhì)化徙菠；據(jù)報道，雌性小鼠的黃素單加氧酶3(FMO3)的活性高于雄性小鼠郁岩。確診的冠心病的定義為：至少在研究開始前30天被診斷為心肌梗死婿奔，冠狀動脈造影術(shù)證明一條或多條心外膜血管≥狹窄50%，冠狀動脈成形術(shù)或冠狀動脈旁路移植術(shù)问慎。重要的是萍摊，納入的患者在方案開始前至少30天沒有經(jīng)歷急性冠狀動脈綜合征(心肌肌鈣蛋白T濃度<0.1μg/L)、冠狀動脈成形術(shù)或冠狀動脈搭橋術(shù)如叼。

排除標準包括抗生素治療(研究開始前<2個月)冰木、心力衰竭(紐約心臟協(xié)會功能分級為≥II)、腎功能衰竭(根據(jù)Cockcroft–Gault公式笼恰，肌酐清除率<30mL/min)踊沸、肝功能衰竭(血小板減少、血清白蛋白降低社证、凝血酶原時間延長)逼龟、消化道癌、炎癥性腸道疾病车匪、梗阻性膽道疾病秦代、既往消化手術(shù)(膽囊切除、胃切除或結(jié)腸切除)臼裂，以及糖尿病或使用降糖藥蚯景。

自稱經(jīng)常喝RW的患者（定義為以前至少喝100mL/d的RW）不包括在研究中∏胺剩患者還被要求酒精使用障礙識別測試（AUDIT）得分不超過7分楣索。AUDIT得分用于識別有危險或有害酒精服用行為的人；得分不到7分表明酒精濫用的風險較低淀肿。

心臟研究所（Instituto do Cora??o-InCor-HCFMUSP）的科學委員會和圣保羅大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院的機構(gòu)倫理委員會批準了該研究方案（SDC 4257/15/084-CAAE 57379216.0.0000.0068）媳惦。所有患者在參與研究前都給予了書面知情同意。

對于樣本量的計算劈遂，我們假設(shè)在RW干預后给急，TMAO濃度將下降1.0μM，并且患者內(nèi)的標準偏差為1.5%疮炼。這些假設(shè)是根據(jù)Tang 等人的研究做出的烁胳。

我們假設(shè)I類錯誤為P<0.05，測試功率為80%廷支，估計將需要38名患者频鉴。因此，考慮到干預期間10%的脫失率，發(fā)現(xiàn)應該包括42名患者垛孔；使用樣本量計算器進行計算藕甩。

患者被隨機分配開始服用RW的3wk干預或戒酒的3wk干預。

在各自的干預期開始時概作，為所有患者提供Ibravin(巴西葡萄酒協(xié)會)生產(chǎn)和供應用梅洛葡萄品種釀造的RW腋妙。EmbRapa(巴西農(nóng)業(yè)研究公司)對葡萄酒的質(zhì)量進行了評估，并在獲得技術(shù)批準后將其放行供服用讯榕。

使用的葡萄酒是為本研究定制的2014年的Merlot骤素，于2016年8月裝在250mL的瓶子里。之所以選擇Merlot品種愚屁，是因為它是最適合巴西南里奧格蘭德州土壤和氣候的葡萄之一撑枯，樣品就是在那里定制的。之所以選擇250mL的RW劑量和24g的～酒精蛹活，是因為這一劑量的RW已被證明與有益效果有關(guān)簇抑，并已被用于先前幾項關(guān)于RW對腸道微生物組成影響的研究。對于男性來說肩容，適度飲酒可以定義為每天攝入1-3杯標準飲料或相當于10-30g酒精悯堂。

RW樣品的酒精含量（v%）為12.75，總酸度（mEq/L）為95.58勘米，揮發(fā)性酸度（mEq/L）為7.44。它含有109mg/L的總花青素（DescSO2）和2155mg/L的兒茶素總多酚疯忽。

患者收到21個貼有標簽的瓶子和書面指導痪猿，要求他們每天喝250mL，每周5d交掌，持續(xù)3wk续残。他們還得到了一份飲食記錄表，記錄每天的葡萄酒服用量荧孽。在RW干預期結(jié)束后鸵赫，患者歸還了21個RW空瓶并完成了飲食日記。

在獲得書面知情同意后躏升，進行隨機化分組辩棒，患者回訪5次，包括臨床和營養(yǎng)評估膨疏、人體測量和樣本采集一睁。在第一次就診時，沒有樣本采集，由一名訓練有素的護士或醫(yī)生訪視患者者吁；記錄他們的生命體征窘俺、體重、身高和腰圍复凳；并在隨后的四次回訪前1天在家中進行糞便樣本采集瘤泪。

此外，在第一次就診期間育八，患者接受了專業(yè)營養(yǎng)師進行的營養(yǎng)評估均芽，他們提供完成3d飲食記錄的說明，并建議患者保持平時的飲食和體力活動等指導单鹿。

患者還收到關(guān)于2周洗脫期的書面和口頭指示肝珍，在此期間，他們被指示需要避免攝入任何酒精飲料楚辆、發(fā)酵產(chǎn)品芍司、益生菌或益生元。經(jīng)過2個洗脫期和2個干預期后甜序，進行了4次醫(yī)院回訪抽堵，在此期間進行了血樣采集、臨床訪談和營養(yǎng)評估驹拢。研究設(shè)計的示意圖如圖1所示起忠。

（圖1）

每次回訪前1天，患者都會帶回家中采集的糞便樣本帕吆。主要目的是評估RW飲酒組和戒酒組之間腸道微生物組成和血漿TMAO濃度的變化聋芹。

對于生化分析、TMAO分析觅霉、微生物組成分析和代謝組學分析沥涕，收集結(jié)果數(shù)據(jù)的評估者和數(shù)據(jù)分析員對指定的干預措施是雙盲的。

專業(yè)的營養(yǎng)師在每次回訪時都會進行面談绑警，重點是完成飲食日記和遵守飲食指南求泰，即在整個研究過程中避免其他富含多酚的食物、所提供的RW以外的任何酒精飲料计盒、益生菌渴频、益生元和發(fā)酵產(chǎn)品，并保持類似的飲食模式北启。

在這方面卜朗，有書面指示要避免食用啤酒、葡萄或葡萄汁暖庄、漿果或漿果汁聊替、酸奶、康普茶、開菲爾酸菜或其他發(fā)酵蔬菜惹悄，以及任何添加纖維或合成益生菌的產(chǎn)品春叫，如菊粉、低聚果糖或纖維乳制品泣港。

患者還被告知暂殖，如果他們對這些產(chǎn)品的服用有任何疑問，可以打電話或給營養(yǎng)師發(fā)電子郵件墓篇。這些措施旨在減少RW以外的習慣飲食變化對腸道微生物組成的干擾棘爱。

患者被要求在兩次干預結(jié)束后3天(2個工作日和1個周末)記錄他們在過去24小時內(nèi)的食物消耗量包括所有消耗的食物和飲料鲜附，用以完成3d飲食記錄。

膳食評估由人工記錄，回來后進行營養(yǎng)學評估凳嘁“耄總能量诗实、宏量營養(yǎng)素和微量營養(yǎng)素的每日攝入量是根據(jù)巴西食品成分表-TACO和第二版巴西食物成分表確定的韩宦。

定期對患者進行安全性評估，除了去醫(yī)院回訪外恋鞋，還鼓勵患者通過電話或電子郵件聯(lián)系研究人員钟骏，如果他們遇到任何與干預措施有關(guān)的不良健康影響，例如在RW不耐受的情況（有限的頭痛赵须、頭暈企鄙、胃腸道不適，或其他形式的不耐受）业嗅，患者將被排除在外倘谢。

如果有任何并發(fā)癥，例如心肌梗塞篙梢、中風顷帖、心臟或消化道手術(shù)，或者抗生素或抗糖尿病藥物的使用渤滞，該方案就會中止。

患者收到了關(guān)于收集糞便樣本的口頭和書面指示榴嗅。他們被建議在回訪前1天或回訪當天使用帶有DNA穩(wěn)定緩沖液的采集管(Stra TEC Biomedical AG)采集樣本妄呕。

樣本即刻儲存在提供環(huán)境為4°C的冷卻器中，然后被運送到醫(yī)院嗽测，在那里它們立即被冷凍到-20°C的環(huán)境下進行分析绪励。

用PSP Spin Spool Plus DNA試劑盒(Stra TEC Biomedical AG)從200 mg糞便中提取腸道微生物的總DNA。根據(jù)Illumina 16S元基因組文庫制備指南唠粥，擴增細菌16S rRNA基因高變區(qū)(V3-V4)疏魏，序列為338F-5′-TCGT CGGC AGCG TCAG A TGT GTA T AAGA GACA GCCT ACGG GNGG CWGC AG-3′和785R-5′-GTCT CGTG GGCT CGGA TG TGTA TAAG AGAC AGGA CTAC HVGG GTA T CTAA TCC-3′(2×300bp的雙端閱讀片段，插入大小為～550bp)。

根據(jù)Magro等人的說法大莫，DADA2工具用于分析FASTQ序列蛉腌，以從擴增子數(shù)據(jù)中恢復單核苷酸分辨擴增序列變體(ASV)，ASV總數(shù)為1,106厨朗。刪除位于5′處的接頭序列結(jié)束時瑟顶，trimLeft選項設(shè)置為17和21(分別為正向和反向讀取)。

數(shù)據(jù)經(jīng)過了預處理淀然，去除了可能的污染物(線粒體和葉綠體序列)鹿腕，并過濾了不常見的特征(讀取計數(shù)<10的特征，存在于<2個樣本中)悔琉。

分類分配是使用DADA2中實施的樸素Bayesian分類器方法執(zhí)行的悼锻，使用SILVA數(shù)據(jù)庫作為參考(132版)。用豐富度唉攻、辛普森指數(shù)和香農(nóng)指數(shù)評價α多樣性透辜，用稀疏偏最小二乘回歸-判別分析評價β多樣性。所有腸道微生物組成數(shù)據(jù)通過配對分析進行比較最阿。

使用cOmponents（DIABLO）R軟件包6.3.2版進行數(shù)據(jù)整合分析掀塞，用于評估和整合這2個數(shù)據(jù)集。DIABLO是一種多組學整合方法貌砖，通過選擇分子的特征子集喂很，尋求不同數(shù)據(jù)類型的相關(guān)信息，同時在多個表型組之間進行判別皆刺。

它在識別關(guān)鍵的全向性變量的同時少辣，最大限度地利用多個全向性（多組學）數(shù)據(jù)集之間的共同或相關(guān)信息。DIABLO是一種基于組件的方法（或降維技術(shù)）羡蛾，它將每個數(shù)據(jù)集轉(zhuǎn)化為組件漓帅，使組件和感興趣的表型之間的相關(guān)性最大化。DIABLO分析的第一步涉及選擇成分的數(shù)量痴怨。正確的成分數(shù)可以通過評估所有指定成分數(shù)的模型性能來評估忙干。

這項分析的目的是同時識別相關(guān)和區(qū)分微生物區(qū)系和血漿代謝組學的特征，能夠在患者隊列中區(qū)分RW和酒精戒斷干預浪藻。

我們跨5個組件對該模型進行了評估捐迫。使用Perf函數(shù)執(zhí)行評估，將交叉驗證方法設(shè)置為Leave-One-Out(驗證=“l(fā)oo”)爱葵。在此過程中施戴，使用不同的預測距離(最大距離、質(zhì)心距離或馬氏距離)將每個新的觀測值分配給最終的預測類別萌丈。性能圖(補充圖2)顯示赞哗，錯誤率從1個分量降低到2個分量峡哥。

在我們的數(shù)據(jù)集中，我們發(fā)現(xiàn)Mahalanobis距離（一種衡量點和分布之間距離的多變量距離指標）產(chǎn)生了最好的準確性蕴脯，表明最佳組件數(shù)量是2烙昼。

下一步是使用tune.block.splsda函數(shù)調(diào)整每個數(shù)據(jù)集和每個組件選擇的特征數(shù)量（keepX參數(shù)）。在可能的keepX變量的網(wǎng)格中選擇最佳的變量數(shù)（從最小的5個到最大的30個特征）袒覆。對于每一個keepX變量的數(shù)量骤顿，該函數(shù)使用留一交叉驗證法評估模型對2個組的判別性能。該模型為第一部分識別了6個分類群鱼虽，為第二部分識別了5個分類群海黍，以及為第一部分識別了9個代謝物，為第二部分識別了5個代謝物付准。這些選定的特征被認為是能更好區(qū)分RW和戒酒干預的多組學生物標志物的代表闲挚。

在治療過程中，經(jīng)過12小時的通宵禁食佩艇，所有42名患者在4次檢查中的每一次都采集了血液樣本年粟。

采集后，將血樣保存在冰箱中送丰，分離成血清和血漿缔俄，放置在Eppendorf 管中，立即保存在-80℃的環(huán)境下進行分析器躏。所有血樣分析只分兩批進行俐载，以確保低變異性的發(fā)生。

為了評估TMAO的個體內(nèi)部變異性登失，我們在方案結(jié)束后隨機選擇了10名患者進行了4次額外的訪問（每周兩次）遏佣。在禁食12小時后，收集血樣并通過3種技術(shù)進行分析揽浙。我們建議患者不要改變藥物状婶、飲食或運動。

對變異性的評估采用了3種不同的采集技術(shù)：

1）采集血樣馅巷，分離成血清和血漿膛虫，放在Eppendorf管中，采集后立即冷凍在-80℃钓猬；

2）采集血樣走敌，分離成血清和血漿，放在Eppendorf管中棋眠，采集后冷藏2小時，然后冷凍在-80℃即粗；或者

3）用指尖的血樣進行干血點（DBS）分析滋样。

按照Wang等所使用的方法迁搜，用200μL甲醇(10μM含有內(nèi)標TMAO-D9)從50μL血漿樣品中提取TMAO，機械攪拌(渦流)后變性蛋白質(zhì)督阿。

血漿樣品經(jīng)離心沉淀蛋白質(zhì)宣葡，取一份上清液注入LC-MS/MS系統(tǒng)。在含有0.7%氯化鈉(w/w)的5%牛血清白蛋白(Sigma-Aldrich)水溶液中加入TMAO (μM)畴制，得到分析曲線(0.2 5~2 0 0μM TMAO)和對照樣品(0.5椰墩、5和100μM TMAO)。TMAO和TMAO分析標準購自Sigma-Aldrich译快。

DBS樣本取自Whatman Paper 903(Protein Saver Card喊傻；GE Healthcare)上采集的2滴全血，經(jīng)指尖刺傷后獲得攻内。DBS卡片在室溫下干燥1h褂磕，為了從DBS樣品中提取TMAO，從DBS卡片上取兩個3.0 mm的圓形“沖頭”匪傍，放置在1.5mL Eppendorf試管中您市，加入含有1.0μM內(nèi)標TMAO-D9的150μL 75%甲醇/25%水(v/v)溶液。將試管與旋渦混合10s役衡，超聲3min茵休，旋流10s，在4?C下10,000×g離心3min手蝎。將1/4的萃取液轉(zhuǎn)移到96孔板(或小瓶)并進樣到LC-MS/MS系統(tǒng)中榕莺。在不加TMAO的全血中加入TMAO(μM)，制備分析曲線(0.2 5~2 0 0μM TMAO)和對照樣品(0.5柑船、5和10 0μMTMAO)帽撑。在TMAO提取程序之后，在卡片上采集血液鞍时，然后進行分析亏拉。

為了定量提取的血漿和DBS樣品中的TMAO及其內(nèi)標TMAO-D9，使用了液相色譜儀(Agilent 1260逆巍；Agilent Technologies)和混合三重四極線型離子陷阱質(zhì)譜儀(3200QTRAP及塘；SCIEX)。

在LC系統(tǒng)中厚较，使用Atlantis HILIC硅膠柱(100×3.0 mm坊蜂，3μm；Waters Corp)蚤岗，保持在35?C卢俯，并采用以下流動相：(A)含有10 mm甲酸銨的水溶液(LC-MS級；Sigma-Aldrich)和(B)含有10 mm甲酸銨的90%乙腈/10%水(v/v)溶液变硬。

進樣體積為10-μL氢熏，洗脫條件為：0~1min想触，0%流動相(A)；1.0~5.20min仲蔼，90%(A)~10%(B)晾充；5.20~7.50min，保持90%(A)些搅；7.50~11.5min崭湾，回到初始0%狀態(tài)(將流速增加至600min/μ)，并在重新進樣前額外平衡1.0min乏呐。TMAO/TMAO-D9保留時間為6.15min猛蔽。

分離后，化合物被電噴霧離子化（Turbo V; SCIEX）源在5200V的正模式下雨涛，霧化器氣體在45psi枢舶，加熱器氣體在50psi，簾子氣體在15psi替久，在MS/MS系統(tǒng)中通過多重反應模式優(yōu)化分析以下m/z轉(zhuǎn)換凉泄。76（前體離子）>58（產(chǎn)物離子）和85>66，分別為TMAO和TMAO-d9蚯根。

使用隨機整數(shù)發(fā)生器（random.org）后众，42名患者中的20名被隨機分配到他們的血漿代謝組分析中。該次分析的樣本量是用MetSizeR程序確定的颅拦。

從4次回訪收集的血樣中蒂誉，選擇20名患者和80個樣本進行非靶向血漿代謝組分析。

樣品儲存在-80?C距帅，用Metabolon公司進行的超高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（Waters ACQUITY）與HESI-II Thermo Scientific Q-Exactive Orbitrap（35,000質(zhì)量分辨率）進行無目標評價右锨。簡要的方法細節(jié)在補充方法中提供。

42名患者的血樣是在禁食12小時后的所有4個回訪日收集的碌秸。血樣分析是在采集當天進行的绍移。每次回訪時，我們都會分析空腹時的血漿葡萄糖尖蚪、甘油三酯啤盯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇嫉簿、低密度脂蛋白膽固醇抬而、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶封鹦、血清白蛋白墓老。

血清膽紅素、血清乳酸脫氫酶晾游、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶豪杉、凝血酶原時間理秃、高敏C反應蛋白、IL-6豆玖、全血計數(shù)、肌酸蹲居、尿素和血清脂多糖沙峻。這些測試是在Dimension EXL分析儀（西門子醫(yī)療）上進行的，但肌鈣蛋白I除外两芳，它是用化學發(fā)光免疫測定法（ADVIA Centaur-XP; TnI-Ultra; Siemens Healthineers）進行的摔寨。

總血紅蛋白、白細胞怖辆、中性粒細胞是复、淋巴細胞和其他免疫細胞（包括單核細胞、肥大細胞竖螃、嗜堿性細胞和嗜酸性細胞）的血液計數(shù)是使用Sysmex XN-2000自動血液分析儀（Sysmex America）獲得的淑廊。

肌酐清除率是用Cockcroft-Gault方程估計的，F(xiàn)riedewald方程被用來估計低密度脂蛋白膽固醇特咆。

使用Windows(SPSS季惩，Inc.)SPSS v.25軟件執(zhí)行所有統(tǒng)計分析∧甯瘢或R(R版本4.0.3画拾；R統(tǒng)計計算項目)。根據(jù)變量的類型(定性或定量)菜职，通過描述性措施對變量進行評估摊矮。對于定性變量，計算了頻率和百分比睬漩。

正態(tài)分布通過Shapiro-Wilk檢驗進行評估影偶。將服從正態(tài)分布的數(shù)據(jù)與雙側(cè)配對t檢驗進行比較。不服從正態(tài)分布的數(shù)據(jù)使用配對的Wilcoxon檢驗進行比較哈痘。

檢驗所有假設(shè)所采用的顯著性水平為5%淀准。使用Spearman等級相關(guān)試驗計算TMAO測量值與尿素、肌酐鼎派、腎小球濾過率烁讨、血脂測量值、宏觀營養(yǎng)素和微量營養(yǎng)素之間的相關(guān)性径候。廣義估計方程法被用來評估不同干預組（RW和戒酒）中個體內(nèi)TMAO測量的模式么养，以及與使用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）抑制劑、血管緊張素受體阻斷劑和利尿劑的關(guān)系速袁。這驗證了時間的影響协固，有一個獨立的利益變量來評估一段時間的措施溢傅。

我們想觀察組與組之間、時間與時間之間以及變量與時間之間的交互作用是否存在差異芋忿。使用Bonferroni檢驗進行配對比較炸客。我們通過重復測量分析和類內(nèi)相關(guān)系數(shù)（ICC）調(diào)查了血漿TMAO的個體內(nèi)部一致性。

（第一期完）

? 中國人民解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學中心營養(yǎng)科碩士

? 畢業(yè)于北京中醫(yī)藥大學戈钢，于北京協(xié)和醫(yī)院實習1年

? 參加全國學術(shù)會議論壇并獲得優(yōu)秀壁報獎痹仙、優(yōu)秀畢業(yè)論文

? 發(fā)表核心期刊文章1篇，申請專利2項

? 主持國家級大創(chuàng)課題1項殉了，參加創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)大賽开仰，獲獎省部級3項、校級5項

??醫(yī)學博士薪铜，科室副主任众弓，主任醫(yī)師，副教授

? 中國健康管理協(xié)會植物營養(yǎng)與健康分會秘書長

??中國優(yōu)生科學協(xié)會理事

??中國營養(yǎng)學會臨床營養(yǎng)分會委員

??中國營養(yǎng)學會微量元素營養(yǎng)分會委員

??中國營養(yǎng)學會首批免試注冊營養(yǎng)師

主要研究糖隔箍、脂代謝與疾病營養(yǎng)谓娃。擅長圍孕期及相關(guān)妊娠并發(fā)癥、體重異常鞍恢、圍手術(shù)期及腫瘤放化療傻粘、慢性代謝性疾病（如高血糖溶隅、血脂迹遏、高同型半胱氨酸等）及老年性癡呆等的營養(yǎng)治療。

? 醫(yī)學博士龄冀，科主任懒俊，主任醫(yī)師，教授圆如，博士生導師

??中國健康管理協(xié)會臨床營養(yǎng)與健康分會會長

??中國營養(yǎng)學會臨床營養(yǎng)分會副主任委員兼秘書長

??中國老年醫(yī)學學會營養(yǎng)與食品安全分會副會長

??中央及全軍保健會診專家

主要研究脂代謝營養(yǎng)的臨床應用钮瘪，擅長肥胖、高脂血癥游颅、胃腸腫瘤及老年/危重癥患者營養(yǎng)治療湿铃，在營養(yǎng)風險篩查、營養(yǎng)評估及營養(yǎng)制劑/功能性食品的臨床應用等方面具有豐富的經(jīng)驗和臨床實踐诞昧。