食品安全檢測(cè)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)一火的、 亞硫酸品紅比色法測(cè)定白酒中的甲醇 姓名：日期： 一壶愤、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、 掌握甲醇測(cè)定的原理 2卫玖、 掌握甲醇測(cè)定的方法 二真葱、 實(shí)驗(yàn)原理 甲醇經(jīng)氧化成加醛后， 與品紅亞硫酸作用生成紫色化合物辐胆， 與標(biāo)準(zhǔn)系列定量讨砍。 過量的高錳酸鉀和硫酸反應(yīng)， 生成的二氧化錳和草酸以及硫酸反應(yīng)生成硫酸錳卸研。 三佩讨、 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 （一） 試劑 1、 高錳酸鉀-磷酸溶液： 稱取 3 克高錳酸鉀多盅， 加入 15 毫升磷酸與 70 毫升水混合勤右， 溶解后加水到 10 毫升徽捶。 貯存在棕色瓶中。 2虫甲、 草酸-硫酸溶液： 稱取 5 克無水草酸溶解與硫酸中至 100 毫升淡箱。 品紅亞硫酸溶液： 稱取 0.1 克堿性品紅， 分次加入 60 毫升 80 度的水研磨辩块，吸取上清液于 100 毫升容量瓶中蛔六， 冷卻后加入 10 毫升亞硫酸氫鈉溶液和 1毫升鹽酸， 過夜废亭。3国章、 甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液： 稱取 1.000 克甲醇， 置于 100 毫升容量瓶中， 加水稀釋 到刻度液兽， 再洗去 10 毫升甲醇溶液置于 100 毫升容量瓶中骂删， 加水稀釋到刻度，作為甲醇標(biāo)準(zhǔn)使用液抵碟。4桃漾、 無甲醇乙醇溶液： 取 0.3 毫升雜醇油 白酒 標(biāo)準(zhǔn)， 檢驗(yàn)是否顯色拟逮， 如果顯色則重新蒸餾撬统。

（二） 儀器1、 分光光度計(jì)（722S） 四敦迄、 實(shí)驗(yàn)方法 1恋追、 分別在 0~5 號(hào)比色管中加入 1 毫克/毫升的甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1 毫升、 0.2 毫升奖岛、 0.4 毫升恕孙、 0.6 毫升、 0.8 毫升淑储、 1 毫升（相當(dāng)于 0.1 毫克帘缤、 0.2 毫克、0.4 毫克俏堆、 0.6 毫克憋屑、 0.8 毫克、 1 毫克）篡呆。 再分別于比色管中汽后， 加入 0.5 毫升無甲醇乙醇。 再在比色管中各加水至 5 毫升摇龟， 再各加入 5 毫升品紅-亞硫酸溶液两胃， 混勻， 放置 10 分鐘遮乾， 再各加入 2 毫升草酸硫酸溶液专肪， 混勻，使之褪色堪侯， 再加入 5 毫升品紅亞硫酸溶液牵祟， 20 度以上靜置 30 分鐘， 用 2厘米比色皿抖格， 用零管調(diào)零點(diǎn)， 于 590 納米波長(zhǎng)處測(cè)吸光度咕晋， 得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程雹拄。 2、 取 1 毫升白酒于于比色管中， 再按照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線制作時(shí)方法操作滓玖， 測(cè)定樣品的吸光度坪哄。 3、 試樣結(jié)果計(jì)算公式：X=試樣中甲醇的含量势篡， 單位為克每百毫升（克/100 毫升）翩肌； m=測(cè)定試樣中甲醇的質(zhì)量， 單位毫克禁悠； v=試樣體積念祭，單位為毫升 計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。 五撤筐、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 1裙系、 不同濃度的甲醇吸光度測(cè)定結(jié)果如下表一所示 表一甲醇吸光度表標(biāo)準(zhǔn)曲線： 管號(hào)0 號(hào) 1 號(hào)2 號(hào)3 號(hào)4 號(hào)5 號(hào) 吸光度00.0370.0610.1420.2130.243 ???vmX甲醇標(biāo)準(zhǔn)曲線0. 1, 00. 20. 2, 0. 0370. 4, 0. 0610. 6, 0. 1420. 8, 0. 2131, 0. 243y = 0. 2808x - 0. = 0. 98-0. 0500. 050. 10. 150. 20. 250. 300. 40. 60. 811. 2毫克數(shù)/mg吸光度(A)系列1線性 (系列1) 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程： y=0、 2808x-0.0291 y----吸光度 x----甲醇毫克數(shù) 2午伍、 白酒中甲醇濃度： 所測(cè)吸光度 A=0.16 根據(jù) y=0.2808x-0.0291 得 x=0.67mg 所以雜醇油 白酒 標(biāo)準(zhǔn)眼膊， =(100×0.6734)/(1×1000)=0.067 克/100 毫升 所以， 所測(cè)試樣中甲醇含量為 0.067 克/100 毫升 3傲轮、 討論： （1）舆鸿、 甲醇的來源 a、 如果用谷糠等為釀酒原料,在高溫蒸發(fā)時(shí),果膠質(zhì)的甲基脂被分解,生成甲醇,蒸酒時(shí)被帶入成品中百膳。

b翰发、 工業(yè)酒精中常混有有害成分甲醇 , 一些不法之徒用工業(yè)酒精兌制假酒 （2）侥镀、 影響甲醇測(cè)定因素 試劑因素 a协超、 亞硫酸鈉品紅溶液 亞硫酸鈉品紅溶液宜與冷暗處保存不宜在室溫下長(zhǎng)期保存， 失效的亞硫酸鈉品紅溶液由于亞硫酸的分解略顯微紅色皇可， （可用此法初步判定是否失效）雕什， 但是加入過量的亞硫酸鈉會(huì)降低顯色的靈敏度． 故亞硫酸鈉品紅溶液的使用時(shí)間不宜過長(zhǎng). b、 甲醇顯色反應(yīng)的靈敏度與乙醇濃度相關(guān)显晶， 乙醇的濃度過高或過低均會(huì)導(dǎo)???vmX致顯色的靈敏度下降贷岸， 測(cè)定是要確保樣品管與標(biāo)準(zhǔn)管的乙醇濃度一致 c、 無甲醇乙醇的影響在 GB/T5009. 48－2003 中無甲醇乙醇溶液的制備中其驗(yàn)證方法是按照操作規(guī)程應(yīng)不顯色磷雇， 該方法存在有很大弊病偿警， 若以目視法作顯色判斷， 當(dāng)甲醇濃度很低時(shí)肉眼是無法判定是否有色的唯笙； 若以分光光度計(jì)進(jìn)行比較螟蒸， 空白管中的無甲醇乙醇又從何而來！ 經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證無甲醇乙醇溶液的方法崩掘， 只能在氣相色譜法中驗(yàn)證七嫌。 環(huán)境因素： 在比色法測(cè)定白酒中甲醇含量的方法中少办， 發(fā)色的溫度和時(shí)間是決定最終檢測(cè)結(jié)果關(guān)鍵， 由于溫度的過低或過高都會(huì)對(duì)結(jié)果帶來相當(dāng)大的影響實(shí)驗(yàn)二诵原、 白酒中糠醛的測(cè)定 姓名：日期： 一英妓、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、 掌握糠醛測(cè)定的原理 2狠寒、 掌握糠醛測(cè)定的方法 二呈篱、 實(shí)驗(yàn)原理 白酒中的糠醛在紫外波長(zhǎng)為 277 納米處有最大的吸收值， 可由對(duì)比測(cè)定出酒中的糠醛含量伐狼。

三臣塑、 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 （一） 試劑 糠醛 （二） 儀器 紫外分光光度計(jì) 四、 實(shí)驗(yàn)方法 1疟骤、 樣品處理： 將白酒稀釋 5 倍 2药阔、 吸取 0.1 毫克/毫升的糠醛溶液分別在 0~6 號(hào)比色管中加入 0.0 毫升、 0.1毫升陨梅、 0.3 毫升译教、 0.5 毫升、 0.7 毫升押强、 1 毫升拖揩、 1.2 毫升于比色管中， 加水至總體積 10 毫升溜棉， 再各加入 25 毫升的 50%乙醇至 25 毫升丽示， 以 10 毫升水和 15 毫升 50%的乙醇溶液混合后調(diào)零， 測(cè)定 7 個(gè)比色管中的溶液吸光度菲饼， 得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程肾砂。 3、 取樣液 10 毫升于 25 毫升比色管中宏悦， 用 50%的乙醇溶液稀釋到 25 毫升镐确，搖勻， 按照上述方法測(cè)定樣液吸光度饼煞。 4源葫、 計(jì)算公式公式中 C 為糠醛含量， 單位克/100 毫升v 為樣液體積砖瞧， 單位毫升息堂； k 為稀釋倍數(shù) 五、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 1块促、 不同濃度梯度的糠醛溶液吸光度如下表 2 所示表 2 糠醛吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線 管號(hào)0 號(hào) 1 號(hào)2 號(hào)3 號(hào) 4 號(hào) 5 號(hào) 6 號(hào) 吸光度 -0.01 0.152 0.531 0.868 1.150 1.722 1.964 ????vkcX白酒中糠醛標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 1. 6683x + 0. = 0. 998-0. 500. 511. 522. 500. 20. 40. 60. 811. 21. 4糠醛毫升數(shù)吸光度系列1線性 (系列1) 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程： y=1.668x+.0054 y—吸光度x—糠醛毫升數(shù) 2荣堰、 白酒中的糠醛濃度為： 所測(cè) A=0.028 則， 根據(jù) y=1.668x+0.0054 x=0.01355 所以竭翠， 根據(jù) 得持隧， X=3.39 所以即硼， 樣品中甲醛含量為 3.39g 六、 討論 1腕浴、 糠醛的來源糠醛又名吠喃甲醛， 白酒中的糠醛主要來源于各種谷物及稻皮条焙、 谷糠等釀酒原料阅六。

它是白酒中釀酒輔料（填充料） 中的多縮戊糖分解產(chǎn)生的。 2漂熙、 影響糠醛測(cè)定因素 無糠醛乙醇及濃度的選擇酒中主要成分是水和乙醇芒单， 糠醛易溶于乙醇中， 所以選用分析純—尤水乙醇.稀釋至 10- 60%用紫外分光光度計(jì)測(cè)定袖况， 結(jié)果在此范圍內(nèi)不受影響.因此抗躺， 選用與白酒乙醇濃度接近的 50%（v/v） 乙醇溶液及稀釋樣品使用。????vkcX實(shí)驗(yàn)三抢驴、 白酒中雜醇油的測(cè)定 姓名：日期： 一蛀篓、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、 掌握雜醇油的測(cè)定的原理 2做身、 掌握雜醇油的測(cè)定的方法 二丸爵、 實(shí)驗(yàn)原理 雜醇油成分復(fù)雜， 其中以正己醇汁咏、 正戊醇亚斋、 異戊醇、 正丁醇攘滩、 異丁醇帅刊、丙醇為代表。 本法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)以異戊醇和異丁醇表示漂问， 異戊醇和異丁醇在硫酸作用下生成戊烯和丁烯赖瞒， 再與對(duì)二甲氨基苯甲醛作用生成橙黃色， 與標(biāo)準(zhǔn)系列比較级解， 求出樣品中的雜醇油冒黑。 三、 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 （一）勤哗、 試劑 1抡爹、 0.5%對(duì)二甲氨基苯甲醛硫酸溶液： 稱取 0.5 克對(duì)二甲氨基苯甲醛， 加入硫酸溶液至 100 毫升芒划。 2冬竟、 無雜醇油乙醇： 按照操作方式檢測(cè)是否顯色， 如顯色進(jìn)行處理鼻昼， 3悟津、 雜醇油標(biāo)準(zhǔn)溶液： 取 0.08 克異戊醇和 0.02 克異丁醇山椎， 置于 100 毫升容量瓶中， 加入無雜醇油乙醇 50 毫升宗瓢， 用水稀釋到刻度徒妒。

再?gòu)娜萘科恐形?5 毫升每毫升到 50 毫升容量瓶中删咱， 定容到刻度邻耕， 此溶液中每毫升含 0.1 毫克雜醇油， （二） 儀器 分光光度計(jì) 四完冻、 實(shí)驗(yàn)方法 1腋意、 在 0~4 號(hào)比色管中分別加入每毫升含 0.1 毫克的雜醇油 0.0 毫升容蕉、 0.1 毫 升、 0.2 毫升往软、 0.3 毫升亩当、 0.4 毫升、 0.5 毫升雜醇油標(biāo)準(zhǔn)溶液哟蝉。 再在各個(gè)比色管中加水到 1 毫升刻度蜓耻， 搖勻， 放入冰浴中烂瘫， 沿壁加 2 毫升 0.5%對(duì)二甲氨基苯甲醛硫酸溶液媒熊， 搖勻， 放到沸水中加熱 15 分鐘后坟比， 立即取出冰浴中冷卻芦鳍， 加 2 毫升水， 冷卻混勻葛账， 10 分鐘后柠衅， 以零號(hào)管調(diào)零， 在 520 納米下測(cè)定吸光度籍琳。 2菲宴、 吸取 0.5 毫升白酒置于比色管中， 加水到 1 毫升混勻后按照上述方法趋急， 加試劑喝峦， 測(cè)定吸光度。 3呜达、 計(jì)算公式A ： 樣品中測(cè)定的雜醇油的含量姚垂， 單位克/100 毫升；V ： 樣品的體積數(shù)槽脑， 單位毫升障氛。 五、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 1、 不同濃度梯度的雜醇油溶液吸光度如下表 3 所示 表 3 不同濃度雜醇油吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線： 白酒中雜醇油標(biāo)準(zhǔn)曲線0, 00. 1, 0. 0370. 2, 0. 0650. 3, 0. 0830. 4, 0. 110. 5, 0. 145y = 0. 2749x + 0. = 0. 99100. 020. 040. 060. 080. 10. 120. 140. 1600. 10. 20. 30. 40. 50. 6毫升數(shù)吸光度系列1線性 (系列1) 方程為： y=.0.2749x+0.0046 x-糠醛毫克數(shù)y--吸光度 管號(hào)0 號(hào)1 號(hào)2 號(hào)3 號(hào)4 號(hào) 吸光度0.0370.0650.0830.1100.145 100??VAX2衫沽、 白酒中的雜醇油含量： 所測(cè) A=0.070 根據(jù) y=.0.2749x+0.0046檐鹤， 得 x=0.2379 所以， 根據(jù) 得酒吠， x=0.48 所以冈彭， 試樣中雜醇油含量為 0.48 六、 討論 1灶逃、 雜醇油的來源 雜醇油系指甲醇舶舅、 乙醇外的高級(jí)醇類。

它包括正丙醇鬼胸、 異丙醇、 正丁醇琼牧、異丁醇恢筝、 正戊醇、 仲戊醇巨坊、 己醇撬槽、 庚醇等。 其來源主要為蛋白質(zhì)氨基酸與糖類經(jīng)酵母細(xì)胞“氮代謝” 中分解而成趾撵。 2侄柔、 影響雜醇油測(cè)定因素 （1） 用對(duì)二甲胺基苯甲醛顯色比色法測(cè)定酒中雜醇油含量時(shí)， 不同種類對(duì)顯色劑的顯色程度很不一致占调。 對(duì)相同量醇類暂题， 其顯色靈敏度為異丁醇>異戊醇>正戊醇， 而正丙醇究珊， 異丙醇薪者， 正丁醇等呈色靈敏度極差。 同時(shí)酒中雜醇油成分極為復(fù)雜剿涮， 其比例更為不一言津， 因此用某一醇類作為標(biāo)準(zhǔn)來計(jì)算雜醇油含量時(shí)誤差較大。 為減小測(cè)定誤差取试， 標(biāo)準(zhǔn)雜醇油應(yīng)盡量與酒中雜醉油成分相似署氏。 據(jù)醇類的顯色靈敏度和酒中雜醉油成分分析， 采用異丁 醇與異戊醉作為標(biāo)準(zhǔn)雜醇油混合液馁掺， 其結(jié)果較為接近晓够。， （2） 對(duì)二甲胺基苯甲醛與雜醇油所呈顏色是隨時(shí)間延長(zhǎng)而變淺吐捞， 但變化緩慢移卢， 故采用顯色后立即進(jìn)行比色。 當(dāng)加人顯色劑后應(yīng)搖勻吹蜡。 若不經(jīng)搖勻就置人沸水浴中顯色涩凑， 其結(jié)果偏低很大呈锣。 對(duì)二甲胺基苯甲醛硫酸溶液需新鮮配 制。 存放 2 天后結(jié)果就會(huì)偏低宜掏。 （3） 乙醛含量在 0.1%以下基本上無影響秒准。 過高時(shí)可用鹽酸間苯二胺除 去。 （4） 酒樣管制備時(shí)惹虏， 若采用 lml 酒樣供役， 加 gml 水， 這樣測(cè)定結(jié)果會(huì)偏高精置，因這樣稀釋法總體積往往不足 10ml计寇。 . 100??VAX

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